高壓滅菌鍋為您揭秘高溫滅菌操作中常見錯誤的分析
高溫滅菌是指用熱能殺死微生物,其原理是高溫使原生質(zhì)中的蛋白質(zhì)變性、使酶失活,致使微生物死亡。高溫滅菌主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法和灼燒滅菌法幾種。如果操作不當(dāng),即達(dá)不到預(yù)期的滅菌效果,現(xiàn)就常見錯誤分析如下。1.高壓蒸汽滅菌
蒸汽滅菌屬濕熱滅菌,由于濕熱滅菌有潛能存在,被滅菌物體的溫度比蒸汽的低,蒸汽在其表面凝結(jié)成水,放出潛能,可迅速提高被滅菌物體的溫度。又由于水和水蒸汽比空氣的熱容量大、導(dǎo)熱快、穿透力強(qiáng),所以,與干熱滅菌相比,滅菌需要的溫度低、時間短。由于高壓蒸汽滅菌法水蒸汽的溫度隨其所受壓力的增加而升高,因而滅菌用的高溫蒸汽都是通過加壓獲得的。
手提式高壓滅菌鍋操作中常見的錯誤有:
(1)排氣不徹底。在升壓前應(yīng)將鍋內(nèi)冷空氣排凈,因空氣是熱不良導(dǎo)體,若不排凈,冷空氣就會聚集井滯留在滅菌鍋中消毒筒的中下部,圍繞在待滅菌物的周圍。在這種情況下,假若鍋內(nèi)僅排除一半空氣,當(dāng)壓力表指針達(dá)到105Pa時,鍋內(nèi)實際溫度僅能達(dá)到112℃,比要求的121℃低9℃之多,將導(dǎo)致滅菌不徹底,可能造成大面積染菌。(自動的高壓滅菌鍋,上下排氣閥,都要打開,然后加熱,排空氣)
(2)排氣軟管沒有按要求插入滅菌筒的下部,或排氣軟管斷裂、缺失。滅菌鍋內(nèi)的冷空氣是通過排氣軟管排出的,上述情況將造成滅菌筒外的蒸汽直接經(jīng)排氣閥排出鍋外,滅菌鍋內(nèi)的空氣排放受阻。
(3)消毒筒內(nèi)物品堆積太緊、太滿,阻礙蒸汽的流通和熱交換,使容器內(nèi)升溫減慢,造成物體內(nèi)部殺菌不完全。
(4)升溫過快。滅菌的時間是以達(dá)到要求溫度后的持續(xù)時間計算的,但溫度的升降過程同樣起到殺菌的作用,升降溫度過快會通過影響總的積溫而影響滅菌效果。另外,升溫過快,特別是使用外源蒸汽的情況下,會造成被滅菌物體內(nèi)部升溫滯后于壓力表指示溫度。
(5)滅菌的物體體積(容量)過大。組織培養(yǎng)中或常規(guī)微生物實驗中,高溫蒸汽滅菌通常要在121℃(即蒸汽壓力為1kg/cm2或15磅/寸2,或0.105MPa)下保溫15min。這一規(guī)定僅適用于試管、三角瓶中小于200ml容量的。若體積太大,特別是固體培養(yǎng)基,會造成滅菌不徹底,應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時間。
(6)任意延長滅菌時間。規(guī)定的滅菌溫度和時間是經(jīng)過科學(xué)試驗確定的,只要按照正確的滅菌程序是能達(dá)到滅菌目的的。但在實踐中常有人為了“保證徹底滅菌”而任意延長滅菌時間。這樣忽視了殺菌過程中溫度對培養(yǎng)基成分的破壞作用,是得不償失的。
(7)溫度不穩(wěn)定。滅菌過程中溫度(壓力)忽高忽低,特別是手提式電能滅菌鍋,它沒有控溫裝置,難于控溫。操作者可配置調(diào)壓變壓器,通過調(diào)節(jié)電壓控溫。此外,還常遇到滅菌鍋內(nèi)加水太少(應(yīng)加2~3L);容器內(nèi)裝的溶液量過多(應(yīng)少于2/3);安全閥失靈等問題。
2.干熱滅菌
干熱滅菌指在烘箱160℃溫度下,維持2h,消除物體上的微生物的方法。常見錯誤有:
(1)將滅菌物品(如培養(yǎng)皿)堆摞放置,且堆得過滿、過擠,阻礙空氣流通和熱量的傳遞、交換;
(2)升溫時不打開箱頂通風(fēng)孔,影響箱內(nèi)冷空氣及水汽的排除;
(3)高溫(80℃以上)下開箱取物,熱蒸汽噴出造成燒傷及突然降溫,使玻璃器皿破裂;
(4)溫度過高(180℃以上)造成包裝紙、棉塞焦化,失去防菌或過濾作用;
(5)將不耐熱的槍頭、離心管、試管帽、濾器等塑料制品放入烤箱內(nèi)滅菌,而致熔化。
3.灼燒滅菌
即直接利用火焰將微生物灼燒致死。特點:簡便、迅速、徹底。主要用于接種工具及器皿的滅菌。如接種杯、鑷子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的鋁箔的滅菌常見的錯誤有:
(1)接種工具的滅菌范圍不夠,如長度不夠,灼燒時沒有旋轉(zhuǎn)造成內(nèi)外側(cè)滅菌不勻;
(2)接種工具沒有降至常溫即用于接種;
(3)對玻璃器皿灼燒過度,使棉塞、封口膜焦化或熔化